ВЛИЯНИЕ СЕСКВИТЕРПЕНОВОГО γ-ЛАКТОНА АХИЛЛИНА НА УРОВЕНЬ ЛИПИДОВ И ЭКСПРЕССИЮ мРНК КЛЮЧЕВЫХ ГЕНОВ МЕТАБОЛИЗМА ЛИПИДОВ В КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ ГЕПАТОМЫ ЛИНИИ HTC

Цель исследования. Изучить влияние сесквитерпенового γ-лактона ахиллина на содержание липидов и экспрессию мРНК ключевых генов метаболизма липидов в клетках гепатомы линии НТС при экспериментальной гиперлипидемии. Материалы и методы. Экспериментальную гиперлипидемию в культуре гепатомы моделировали добавлением в инкубационную среду жировой эмульсии липофундина МСТ/ЛСТ в конечной концентрации 0,05 %. Через 48 ч инкубации клеточной культуры НТС с ахиллином в концентрации 500 мкМ исследовали жизнеспособность клеток с помощью МТТ-теста и оценивали уровень в них общих липидов флуоресцентным методом с витальным красителем Nile Red и содержание триацилглицеролов (ТАГ) и холестерола ферментативным методом. РНК из клеток выделяли с помощью набора Illustra RNAspin Mini RNA Isolation Kit («GE Healthcare»). Уровень экспрессии мРНК ключевых генов метаболизма липидов оценивали при помощи количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени по технологии TaqMan. Результаты. Инкубация клеток с липофундином МСТ/ЛСТ (0,05 %) приводило к увеличению интенсивности флуоресценции Nile Red в клетках и повышению в них уровня ТАГ. Ахиллин в концентрации 500 мкМ не оказывал цитотоксического действия на клеточную культуру НТС и приводил к уменьшению содержания холестерола и ТАГ в клетках при гиперлипидемии индуцированной липофундином. Это сопровождалось снижением интенсивности флуоресценции красителя Nile Red в клетках. В культуре гепатомы ахиллин повышал экспрессию мРНК генов карнитин-пальмитоилтрансферазы 1 ( Cpt1a ) и 2 ( Cpt2 ), 7-альфа-гидроксилазы ( Cyp7a1) и 3-гидрокси-3-метилглутарил КоА редуктазы (Hmgcr ). На экспрессию гена ацилКоА холестерол ацилтрансферазы ( Soat1 ) ахиллин оказывал ингибирующее влияние. Заключение. Снижение содержания холестерола, ТАГ и интенсивности флуоресценции Nile Red в клетках гепатомы при экспериментальной гиперлипидемии под действием ахиллина в концентрации 500 мкМ может быть обусловлено увеличением экспрессии генов карнитин-пальмитоилтрансферазы 1 и 2; 7-альфа-гидроксилазы, что способствует увеличению транспорта жирных кислот в митохондрии и синтезу из холестерола желчных кислот. Наряду с этим, ингибирование гена ацилКоА холестерол ацилтрансферазы способствует уменьшению образования эфиров холестерола и их накоплению в гепатоцитах.

сесквитерпеновый γ-лактон ахиллин, гемфиброзил, культура гепатомы линии HTC, МТТ-тест, экспрессия мРНК, гены метаболизма липидов

1. Буеверова Е. Л., Драпкина О. М., Ивашкин В. Т. Атерогенная дислипидемия и печень // Рос. мед. вести. 2008. Т. 13, № 1. С. 17-23.

2. Адекенов С. М., Гафуров Н. М., Турмухамбетов А. Ж., Ивлев В. И. Терпеноиды Achillea micrantha // Химия природных соединений. 1987. № 2. С. 305-306.

3. Ратькин А. В., Кайдаш О. А., Пфаргер Ю. А. и др. Гиполипидемическое действия сесквитерпеновых лактонов арглабина и ахиллина на модели острой гиперлипидемии // Сиб. мед. обоз. 2014. Т. 5, № 89. С. 40-43.

4. Ilan E., Tirosh О., Madar Z. Triacylglycerol-mediated oxidative stress inhibits nitric oxide production in rat isolated hepatocytes // J. Nutr. 2005. Vol. 135, N 9. P. 2090-2095.

5. Tirosh O., Ilan E., Anavi S. et al. Nutritional lipid-induced oxidative stress leads to mitochondrial dysfunction followed by necrotic death in FaO hepatocytes // Nutrition. 2009. Vol. 25. P. 200-208.

6. Shen Ch., Meng Q., Schmelzer E., Bader A. Gel entrapment culture of rat hepatocytes for investigation of tetracycline-induced toxicity // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2009. Vol. 238. P. 178-187.

7. Folch J., Lees M., Sloane Stanley G. H. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. Vol. 226. P. 497-509.

8. Pfaffl M. W. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR // Nucleic. Acids. Res. 2001. Vol. 29, N 9. P. e45.

9. Goldstein J. L., Bose-Boyd R. A., Brown M. S. Protein sensors for membrane sterols // Cell. 2006. Vol. 124. P. 35-46.

10. Wang Y. M., Zhang B., Xue Y. et al. The mechanism of dietary cholesterol effects on lipids metabolism in rats // Lipids Health. Dis. 2010. Vol. 9, N. 4. Р. 1-6.

11. Lee M. K., Moon S. S. et al. Naringenin 7 O-cetyl ether as inhibitor of HMG-CoA reductase and modulator of plasma and hepatic lipids in highcholesterol-fed rats // Bioorg. Med. Chem. 2003. Vol. 11, № 3. P. 393-398.

12. Miyazaki A., Sakai M., Sakamoto Y., Horiuchi S. Acyl-coenzyme A: cholesterol acyltransferase inhibitors for controlling hypercholesterolemia and atherosclerosis // Curr. Opin. Investig. Drags. 2003. Vol. 4, N 9. Р. 1095-1099.

13. Chen Z. Y., Jiao R., Ma K. Y. Cholesterol-lowering nutraceuticals and functional foods // J. Agric. Food Chem. 2008. Vol. 56, N 19. P. 8761-8773.

14. Roglans N., Peris C., Verd J. C. et al. Increase in hepatic expression of SREBP 2 by gemfibrozil administration to rats // Biochem. Pharmacol. 2001. Vol. 62, N 6. P. 803-809.

15. Gbaguidi G. F., Agellon L. B. The inhibition of the human cholesterol 7alpha-hydroxylase gene (CYP7A1) promoter by fibrates in cultured cells is mediated via the liver x receptor alpha and peroxisome proliferator-activated receptor alpha heterodimer // Nucleic. Acids Res. 2004. Vol. 32, № 3. P. 1113-1121.

16. Bonnefont J. P. et al. Carnitine palmitoyltransferases 1 and 2: biochemical, molecular and medical aspects // Mol. Aspects Med. 2004. Vol. 24, N 5-6. P. 495-520.

17. Munday M. R., Hemingway C. J. The regulation of acetyl-CoA carboxylase--a potential target for the action of hypolipidemic agents // Adv. Enzyme. Regul. 1999. Vol. 39. P. 205-234.